酵母雙雜交檢測（Yeast Two-Hybrid Assay）產(chǎn)品專題
檢測原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid assay）是用于體內(nèi)研究蛋白相互作用的一種非常便利的工具，常用的如GAL4為基礎的系統(tǒng)，使用酵母轉錄因子GAL4來檢測轉錄激活后的蛋白相互作用。某些轉錄因子（如GAL4）由兩個可以分開，功能上相互獨立的結構域組成，N端有一個147個氨基酸組成的DNA結合域（DNA binding domain，BD），C端有一個由113個氨基酸組成的轉錄激活域（transcription activation domain，AD）。BD可以和上游激活序列（UAS）結合，而AD能激活UAS下游基因進行轉錄。單獨的BD或AD不能激活基因轉錄，兩者只有通過某種方式結合在一起形成完整的轉錄激活因子的功能【見圖1】。酵母雙雜交系統(tǒng)主要利用酵母GAL4的這個特性通過兩個雜交蛋白在酵母細胞中的相互結合及對報告基因的轉錄激活來研究活細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用，對蛋白質(zhì)之間微弱、瞬間的作用都能通過報告基因敏感的檢測到。
酵母雙雜交系統(tǒng)應用：
- 對新的與已經(jīng)蛋白相互作用的鑒定
- 對預測蛋白相互作用的確認
- 對蛋白相互作用區(qū)域的鑒定
圖1. 雙雜交檢測原理圖。兩個蛋白分別表達，一個（誘餌蛋白bait protein）融合到Gal4 DNA結合域表達，另一個（誘捕蛋白prey protein）融合到Gal4轉錄激活結構域（AD）表達。在Y2HGold酵母菌株中，只有當兩個蛋白之間相互作用并結合到Gal4反應性啟動子上才能活化報告基因（AUR1-C, ADE2, HIS3, 和MEL1）的表達。
酵母雙雜交系統(tǒng)操作流程（以Clontech Matchmarker GAL4-based two hybrid assay為例）
完整的Matchmarker篩選過程包含以下步驟：
*步：執(zhí)行對照實驗；
第二步：誘餌載體的構建及自我激活和毒性檢測；
第三步：篩選Mate&Plate文庫
第四步：確認和闡釋結果
圖3. 使用Mate&Plate文庫進行雙雜交篩選。捕獲蛋白（bait protein）是酵母菌Y2HGold表達的Gal4 DNA-BD融合蛋白。高復雜性文庫表達Gal4 AD融合蛋白，由Y187酵母菌提供。當兩種轉化菌株混合過夜能接合產(chǎn)生二倍體（Diploids）。此二倍體含有4個報告基因：HIS3，ADE2，MEL1和AUR1-C，受雙雜交作用而活化表達。
酵母雙雜交檢測需要產(chǎn)品信息：
我司（懋康生物）提供酵母雙雜交研究需要的一系列產(chǎn)品，從酵母菌株、酵母質(zhì)粒、酵母培養(yǎng)基到篩選標志（抗生素），咨詢，，：2971634497。
一、富集培養(yǎng)基（Rich Medium 酵母培養(yǎng)）
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MS6301-350G | YPD Agar Medium YPD瓊脂培養(yǎng)基 | 350g | 550 |
MS6302-250G | YPD Medium YPD液體培養(yǎng)基 | 250g | 438 |
MS6303-350G | YPDA Agar Medium YPDA瓊脂培養(yǎng)基 | 350g | 550 |
MS6304-250G | YPDA Medium YPDA液體培養(yǎng)基 | 250g | 438 |
【補充描述】：
- YPD是用于大多數(shù)酵母菌生長所需的酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖優(yōu)化配比后組成的混合物；
- YPDA培養(yǎng)基是在YPD基礎上添加硫酸腺嘌呤，終濃度120 µg/ml。
二、基本培養(yǎng)基（Minimal Medium 酵母培養(yǎng)）
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MS6311-467G | Minimal SD Agar Base SD瓊脂基礎培養(yǎng)基 | 467g | 1428 |
MS6312-267G | Minimal SD Base SD基礎培養(yǎng)基 | 267g | 768 |
MS6313-270G | Minimal SD Agar Base Gal/Raf SD瓊脂基礎培養(yǎng)基（含半乳糖/棉子糖） | 270g | 1428 |
MS6314-185G | Minimal SD Base Gal/Raf SD基礎培養(yǎng)基（含半乳糖/棉子糖） | 185g | 988 |
【補充描述】：
- SD Medium：酵母菌用的基本的合成限定培養(yǎng)基（Minimal synthetically defined medium），包含氮源，碳源（葡萄糖，除非有特殊說明）和DO添加劑（Dropout Supplement）。
- DO（Dropout Supplement or Solution）：特定氨基酸和核苷的混合物，添加到SD base內(nèi)以配制SD Medium。DO缺少一種或者更多未轉化酵母菌需要的營養(yǎng)成分使其在SD Medium上生長，作為營養(yǎng)篩選標志。
三、省卻成分氨基酸混合物（DO Supplements 酵母培養(yǎng)）
類型 | 名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Single Dropout Supplements (SDO) 單一省卻成分添加劑 | DO Supplement -His | MS6316-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -Leu | MS6317-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Trp | MS6318-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Ura | MS6319-10G | 10g | 418 | |
Double Dropout Supplements (DDO) 雙省卻成分添加劑 | DO Supplement -His/-Leu | MS6320-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Ura | MS6321-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Leu/-Trp | MS6322-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Met/-Trp | MS6323-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Trp/-Ura | MS6324-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Trp/-His | MS6325-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Ura/-Leu | MS6326-10G | 10g | 418 | |
Triple Dropout Supplements (TDO) 三省卻成分添加劑 | DO Supplement -His/-Leu/-Trp | MS6331-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Leu/-Ura | MS6332-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -His/-Trp/-Ura | MS6333-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp | MS6334-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura | MS6335-10G | 10g | 418 | |
Quadruple Dropout Supplements (QDO) 四省卻成分添加劑 | DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp | MS6341-10G | 10g | 418 |
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp | MS6342-10G | 10g | 418 | |
DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura | MS6343-10G | 10g | 418 |
四、篩選抗生素（底物）
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MS0002-1ML | Aureobasidin A （AbA）金擔子素A（1 mg/ml） | 1ml | 900 |
MF2003-25MG | X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 | 25mg | 285 |
MF2001-1G | X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 | 1g | 280 |
【補充描述】：
1）Aureobasidin A （AbA）金擔子素A是報告基因AUR1-C的篩選抗生素，以判斷酵母菌是否能表達賦予其AbA抗性的酶。
2）X-α-Gal是α-半乳糖苷酶（由MEL1基因編碼）的底物，當雙雜交發(fā)生時MEL1報告基因正常表達催化底物發(fā)生顏色反應，使得酵母菌落呈藍色。
3）X-Gal是ß-半乳糖苷酶（由lacz基因編碼）的底物。
五、酵母質(zhì)粒提取試劑盒
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
D3376-01 | 酵母質(zhì)粒抽提試劑盒 Yeast Plasmid Kit（Omega Biotek） | 50次 | 495 |
【試劑盒工作原理】：
該試劑盒把硅膠柱純化技術同經(jīng)典的SDS堿裂解法結合起來，用戶可在1小時內(nèi)從酵母培養(yǎng)液中純化出高純度的質(zhì)粒DNA。純化過程不需用任何到有害的有機物抽提，亦不需用到耗時的乙醇沉淀。質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量依賴于酵母攜帶質(zhì)粒的拷貝數(shù)，酵母菌株以及生長條件。 一般來說，酵母質(zhì)粒的拷貝數(shù)較低，5.0ml過夜培養(yǎng)液中質(zhì)粒DNA產(chǎn)量約為1.0 µg左右。純化的質(zhì)粒可直接用于酶切，PCR,電轉化等應用。酵母收集后,加入破壁酶和玻璃珠去除細胞壁,用傳統(tǒng)堿裂法裂解細胞，然后將獲得的上清液轉移至結合柱結合DNA，經(jīng)過兩次快速洗滌，zui后用無菌水洗脫出質(zhì)粒DNA。
六、酵母轉化試劑盒
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2501-200T | Yeast Transformation Kit 酵母轉化試劑盒 | 200T | 768 |
【補充描述】：
酵母質(zhì)粒轉化試劑盒，含PEG/liAC酵母轉化需要的所有試劑，操作簡單，轉化效率高。
七、酵母雙雜交菌和感受態(tài)細胞
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2351-300UL | Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 | 300μl | 咨詢 |
MF2352-100UL | Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受態(tài)細胞 | 100μl | 咨詢 |
MF2353-300UL | Y187 Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌 | 300μl | 咨詢 |
MF2354-100UL | Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受態(tài)細胞 | 100μl | 咨詢 |
八、酵母菌載體
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF3601-20UL | pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3602-20UL | pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對照載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3603-20UL | pGBKT7-Lam Vector 酵母雙雜交對照載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3604-20UL | pGADT7-AD Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3605-20UL | pGADT7-T Vector 酵母雙雜交對照載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3606-20UL | pBridge Vector 酵母三雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢 |
MF3609-20UL | pGBT9 Vector 酵母雙雜交克隆載體 | 20μl | 咨詢 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供產(chǎn)品。