PKH26細(xì)胞連接試劑盒（用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記）

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

PKH26；Calcein AM 鈣黃綠素；PKH67；CFDA SE；In vivo cell tracking 體內(nèi)細(xì)胞示蹤；Sigma MINI26；Phanos Technologies；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

PKH26細(xì)胞連接試劑盒（用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記）（PKH26 Cell Linker Kit for General Cell Membrane Labeling）是一款基于熒光探針PKH26，用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記的檢測試劑盒，適用于體外細(xì)胞標(biāo)記，體外細(xì)胞增殖以及長期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究等。

PKH26是一種的膜標(biāo)記探針，結(jié)構(gòu)上帶有一長脂肪族尾巴，能穩(wěn)定插入細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)域。PKH26熒光處于黃-橙色光譜區(qū)間（見圖1），大激發(fā)波長為551nm，大發(fā)射波長是567nm，與羅丹明或PE檢測系統(tǒng)兼容。也可能用標(biāo)準(zhǔn)熒光素（Fluorescein）激發(fā)濾片，但熒光強(qiáng)度可能會(huì)有些降低。PKH26具長的體內(nèi)半衰期，超過100天，非常適用于體內(nèi)細(xì)胞示蹤、細(xì)胞增殖研究和其他長期實(shí)驗(yàn)。

稀釋液C（Diluent C）是本試劑盒配套提供的一種水溶性溶液，特別設(shè)計(jì)的一種標(biāo)記媒介能維持細(xì)胞活力，同時(shí)大化染料溶解性和標(biāo)記過程中的染色效率。Diluent C對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞來說是等滲的，不含去污劑或有機(jī)溶劑，也不含生理鹽和緩沖劑。根據(jù)細(xì)胞類型，染料標(biāo)記后膜的內(nèi)在化程度，標(biāo)記細(xì)胞可能呈現(xiàn)不同的狀態(tài)，從明亮，到均勻點(diǎn)狀或斑駁狀。然而，PKH26熒光在生理范圍內(nèi)不依賴于pH，且每個(gè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度通常不受染料位置的影響。

圖1. PKH26的激發(fā)和發(fā)射光譜圖

我司（懋康生物）提供三種規(guī)格的PKH26細(xì)胞連接試劑盒（用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記），其中：

Mini Kit（CAT#：MX4021-100UL）建議用于小量或初步研究。當(dāng)使用2ml染色體積（含2μM 終濃度的PKH26），本試劑盒含有足量的染料用于檢測25次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次），和足量的Diluent C用于5次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次）。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定加的染料濃度。

Midi Kit（CAT#：MX4021-200UL）適用于中量研究。當(dāng)使用2ml染色體積（含2μM 終濃度的PKH26），本試劑盒含有足量的染料用于檢測50次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次），和足量的Diluent C用于30次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次）。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定加的染料濃度。

Maxi Kit（CAT#：MX4021-500UL）適用于大量或體內(nèi)研究。當(dāng)使用2ml染色體積（含2μM 終濃度的PKH26），本試劑盒含有足量的染料用于檢測125次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次），和足量的Diluent C用于30次細(xì)胞樣本（2×10⁷個(gè)細(xì)胞/次）。用戶需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩韮?yōu)化確定加的染料濃度

產(chǎn)品包裝

注意事項(xiàng)

1）   PKH26是以溶于乙醇的儲(chǔ)存液形式提供，保存的過程中需避光并擰緊蓋子，以防止溶液揮發(fā)引起的染料濃度提高。使用前需檢查是否有結(jié)晶，若有結(jié)晶，需在37℃水浴溶晶，超聲或渦旋直至*溶解。

2）   Diluent C使用前需置于室溫回溫之后再配制標(biāo)記用的細(xì)胞和染料工作液。Diluent C是無菌溶液，不含任何防腐劑或抗生素，使用和保存過程中都注意無菌。

3）   PKH26不能保存在Diluent C內(nèi)，保存在Diluent C的染色工作液需在使用前配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。

4）   熒光染料均存在淬滅問題，操作和儲(chǔ)存過程中需注意避光，以減緩熒光淬滅。

5）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作步驟

一、  自行準(zhǔn)備儀器和試劑（試劑盒不提供，用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記）

二、  常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記

【注意事項(xiàng)】：

1）   通過分配脂質(zhì)染料進(jìn)入細(xì)胞膜來進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記強(qiáng)度是染料濃度和細(xì)胞濃度共同作用的一種功能，且不會(huì)飽和。因此，用來標(biāo)記的染料濃度需要有限，過度標(biāo)記細(xì)胞會(huì)引起細(xì)胞膜完整性喪失和降低的細(xì)胞復(fù)原能力。

2）   以下步驟適用于體外或離體標(biāo)記干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元或任何需要將染料插入細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)的其他細(xì)胞類型。而體內(nèi)標(biāo)記、血小板標(biāo)記，或在含非吞噬細(xì)胞的群體內(nèi)選擇性標(biāo)記吞噬細(xì)胞，需對(duì)步驟做適當(dāng)修改。

3）   需在單克隆抗體染色前進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞膜染色。4℃單克隆抗體染色過程中膜染料仍能維持穩(wěn)定。然而，如果單抗標(biāo)記后再室溫下進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞膜染色，極有可能引起單抗的“蓋帽”發(fā)生。

4）   以下步驟中用到的細(xì)胞和染料濃度是推薦用的起始濃度，廣譜適用于各種細(xì)胞類型。用戶需根據(jù)自身細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定加的染料和細(xì)胞濃度，通過對(duì)染色后細(xì)胞活力（比如典化丙啶排斥），熒光強(qiáng)度，染色均勻性和對(duì)待研究細(xì)胞功能無影響等方面來綜合評(píng)估。

5）   PKH26染色過程中需避免疊氮化物或代謝毒物的存在。

6）   雖然粘附在固相基質(zhì)上的貼壁細(xì)胞可能被標(biāo)記，使用單細(xì)胞懸浮液能得到更勻質(zhì)的染色結(jié)果。染色前使用蛋白消化酶比如胰酶/EDTA處理貼壁或結(jié)合細(xì)胞制備成分散的單細(xì)胞懸液能得到hao的染色結(jié)果。

【染色流程】：

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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