重組霍亂毒素B亞基 血清
簡要描述：
重組霍亂毒素B亞基 血清霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產(chǎn)生的毒力因子，會引起嚴重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa
產(chǎn)品時間：2025-06-04
打印當前頁Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated
重組霍亂毒素B亞基（CF647標記，深紅色熒光）
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
重組霍亂毒素B亞基（CF647標記，深紅色熒光） | MX0942-100UG | 100μg | 4786 |
背景描述
霍亂毒素（Cholera toxin，CTX）是霍亂弧菌產(chǎn)生的毒力因子，會引起嚴重腹瀉以及人體脫水。CTX屬于AB5亞基家族。天然六聚體蛋白含兩個亞基，分子量約85kDa。由一個A亞基（約27.2kDa）和五個B亞基（約11.6kDa/亞基）組成，B亞基以五聚體環(huán)的方式排列，呈明顯的五度對稱，負責毒素識別并吸附細胞表面的神經(jīng)jie苷脂GM1。
A亞基催化刺激性G蛋白α亞基（Gαs）的ADP核糖基化，降低GTPase活性和活化α亞基。Gαs的活化引起腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性增加，進而促使cAMP水平提高。A亞基還能ADP核糖基化視桿細胞外節(jié)膜盤的轉(zhuǎn)運蛋白，使得GTPase失活。霍亂毒素還是一種高效的黏膜疫苗佐劑，通過抑制IL-12生產(chǎn)來誘導2型輔助性T細胞的免疫應答。
霍亂毒素B亞基（CTB）對細胞無毒，本質(zhì)上不含腺苷酸環(huán)化酶活性。CTB通過結(jié)合神經(jīng)jie苷脂GM1附著到細胞上，是小膠質(zhì)細胞的良好標記物（這類細胞表面富含神經(jīng)jie苷脂GM1），但不適合標記少突膠質(zhì)細胞或星形膠質(zhì)細胞。CTB是利用組化方法研究軸突運輸?shù)膬?yōu)秀示蹤劑。CTB也是常用的脂筏標記物，脂筏是富含膽gu醇和鞘脂的膜微區(qū)，在細胞信號轉(zhuǎn)導和蛋白質(zhì)運輸中發(fā)揮重要作用。
產(chǎn)品描述
本品是偶聯(lián)上深紅色熒光素-CF647（Ex/Em=650/665 nm）的重組霍亂毒素B亞基（rCTB），即Recombinant Cholera Toxin B subunit, CF647-conjugated，簡寫：CF647 conjugated- rCTB，適用于神經(jīng)學研究中的束路追蹤，靶向神經(jīng)jie苷脂GM1）結(jié)合和逆行運輸。也可在活細胞或固定細胞成像中用作脂筏標記物和內(nèi)吞示蹤劑。
保存與運輸方法
保存：-20℃保存，至少6個月有效。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 本品以凍干粉形式提供，由于量比較少，初次使用前需置于室溫回溫至少30min，低速離心后，再開蓋直接往瓶內(nèi)加入合適的溶劑進行溶解。
2） CF系列熒光染料是Biotium的注冊商標，Alexa Fluor和DyLight系列染料是Thermo Fisher的注冊商標，Cy系列染料是Cytiva的注冊商標。
3） 本品僅供科研用途，絕不可以用于臨床或診療用途。
4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
以下是用熒光標記的rCTB對細胞進行標記的實驗流程。對于其他的應用（比如：神經(jīng)示蹤），請根據(jù)應用查找相應的文獻作為參考。
一、 自行準備材料
1.1 磷酸鹽緩沖液（PBS）（比如：MS3552-500ML）
1.2 牛血清白蛋白（BSA）（比如：MP6101-5G）
1.3 HBSS（比如：MS3505-500ML）
1.4 4%多聚甲醛（比如：MM1504-500ML）
1.5 【可選】Hoehcst 33342（比如：MX4203-10MG，MX4203-1ML，MX4204-10ML）
二、 染料準備
重溶：將低溫保存的CF647 conjugated- rCTB（規(guī)格：100μg）置于室溫回溫至少30min，低速離心3-5min，將粉末離心至管底。直接往瓶子加入100μl無菌水或1×PBS使其充分溶解，即得到1mg/ml的母液。
保存：新鮮制備的CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）置于+4℃避光保存，3個月穩(wěn)定。亦可根據(jù)單次用量分裝后，置于-20℃避光保存，6個月穩(wěn)定，避免反復凍融。
三、 活細胞的表面標記
3.1用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞一次；
3.2用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA稀釋CF647 conjugated- rCTB（1mg/ml）到工作濃度：400ng/ml-1μg/ml。
3.3吸走細胞內(nèi)的緩沖液，加入新鮮配置的CF647 conjugated- rCTB染色工作液。+4℃避光孵育30min。
3.4用4℃預冷的HBSS+0.5% BSA清洗細胞三次；
3.5用4%多聚甲醛固定細胞，+4℃避光固定15min。
3.6用PBS清洗細胞二次，之后進行成像或接著做后續(xù)的染色。【注：根據(jù)實驗需求，考慮是否加入核復染劑-Hoechst 33342等】
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MS3505-500ML | 1×Hanks平衡yan溶液（含鈣鎂，無酚紅） | 500ml |
MP6101-5G | BSA, Standard Grade牛血清白蛋白（標準級別） | 5g |
附錄I幾款CF染料的光譜特征
CF488A | CF568 | CF594 | CF640R | CF647 | CF680R | |
最大Abs/Em | 490/515 nm | 562/584 nm | 593/614 nm | 642/662 nm | 650/665 nm | 680/701 nm |
摩爾吸光系數(shù) | 70,000 | 100,000 | 115,000 | 105,000 | 240,000 | 140,000 |
分子量 | ~914 | ~714 | ~730 | ~832 | ~836 | ~912 |
激發(fā)激光線 | 488nm | 532 nm or 568 nm | 561 to 568 nm | 633, 635 or 640 nm | 633 or 635 nm | 680 or 685 nm |
可替代染料 | Alexa Fluor 488 Cy2 DyLight 488 FITC | Alexa Fluor 568 ATTO 565 Rhodamine Red | Alexa Fluor594 Texas Red DyLight 594 | Alexa Fluor 647, ATTO 647N, Cy5, DyLight 649 | Alexa Fluor647 Cy5 DyLight 649 | Alexa Fluor680 Cy5.5 DyLight 680 IRDye 680LT |
應用 | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 超分辨率成像（STED,TIRF,STORM,SIM, 2-Photon） | 共聚焦顯微鏡 單分子成像 超分辨率成像（SIM, TIRF, STED，STORM） | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 超分辨率成像（STED，2-Photon） | 共聚焦顯微鏡 單分子成像 超分辨率成像（STED，SIM,2-Photon，TIRF,FLImP） | 熒光顯微鏡 共聚焦顯微鏡 流式細胞儀 超分辨率成像（STORM） | 小動物成像儀 超分辨率成像（STORM、3D） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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